小新今年5岁了，不要以为他是那种懵懂无知的小孩，他其实人小鬼大，喜欢漂亮的姐姐，收养了一条棉花糖一样的流浪狗——小白，还经常讲些无厘头的黄色笑话。小新的妈妈美伢是一个全职主妇，粗心而又有点神经质的她经常被小新捉弄得七窍生烟，爸爸野原亦经常被这两母子搞得晕头转向。 《蜡笔小新》的作者以一个5岁小童的眼光，40岁的成年人的心态去观察这个大千世界，看到了许多光怪陆离的景象，小新一家的幽默故事亦由此产生。
故事发生在御伽学园里，大神凉子（伊藤静 配音）是一个身材娇小但个性十分凶悍的傲娇少女。在学园中，有一个名为御伽学园学生互助协会的神秘组织，而大神正是其中的一员。此外，还有患有视线恐惧症的跟踪狂森野亮士（入野自由 配音），外表可爱内心腹黑至极的赤井林檎（伊藤加奈惠 配音），异装癖患者桐木李斯特（野岛裕史 配音），成熟稳重的大姐姐桐木爱丽斯（堀江由衣 配音）等6人均是此神秘组织中的成员。 扶助协会的任务是在紧要关头令需要帮助的人欠下人情，再在需要之时逼迫他们偿还债务，这看似无理的粗暴做法其实饱含了成员们的良苦用心。而为了让世界变得更好，大神和她的七个伙伴们每天都在不懈的努力着。
