小新今年5岁了，不要以为他是那种懵懂无知的小孩，他其实人小鬼大，喜欢漂亮的姐姐，收养了一条棉花糖一样的流浪狗——小白，还经常讲些无厘头的黄色笑话。小新的妈妈美伢是一个全职主妇，粗心而又有点神经质的她经常被小新捉弄得七窍生烟，爸爸野原亦经常被这两母子搞得晕头转向。 《蜡笔小新》的作者以一个5岁小童的眼光，40岁的成年人的心态去观察这个大千世界，看到了许多光怪陆离的景象，小新一家的幽默故事亦由此产生。
故事发生在昭和初年，一群打扮神秘举止怪异的人在夜幕的笼罩下来到了帝都东京府，他们是世世代代都在追踪和狩猎吸血鬼的吸血鬼猎人。 尤里（上村佑翔 配音）虽然身处吸血鬼猎人的阵营之内，却是非常特殊的存在，因为他的体内流淌着人类和狼人的两种血液，因此拥有着比普通人类更为强健的体魄。威拉德（堀内贤雄 配音）拥有着丰厚的学识，是军师和领袖般的存在。多萝西娅（森奈奈子 配音）外表火辣，却拥有着截然相反的冷静头脑，无论怎样紧要的危机时刻都能做出正确的判断。菲利普（小林裕介 配音）年纪虽小，却拥有着极为复杂的过去。
津场木葵（东山奈央 配音）表面看来只是一个平凡的大学二年级女生，实际上从祖父那里继承了能够看见妖怪的力量。祖父过世之后，葵忽然在某一天被召唤到了名为“天神屋”旅馆之中，这座旅馆坐落在妖魔鬼怪聚集的隐世之中。 原来，葵的祖父在生前签下了巨额债务，无奈之下只能用葵来还债，答应将葵嫁给天神屋的大老板（小西克幸 配音），然而，葵无论如何都不愿意违背自己的心意，于是，她决定留在天神屋，靠打工还债。完美主义者银次（土岐隼一 配音）、性格冲动粗鲁，但却每一天都在认真努力的晓（内田雄马 配音）、外表冷漠但内心火热的雪女（加隈亚衣 配音），和这些妖怪们在一起，葵的日常拉开了序幕。
故事以主角的第一人称进行，“我”（浅沼晋太郎 配音）是京都大学的一名三年级生，原本期待着有一个玫瑰色多姿多彩的大学生活，希望自己能交上飘逸黑长发的漂亮女朋友。然而事与愿违，主人公经历了一场失败的恋爱，身边的朋友也少得可怜。主人公唯一的朋友小津（吉野裕行 配音），长相像一只妖怪，以捉弄情侣为乐。主人公常常唾弃小津，却离不开他。随后主人公认识了师妹明石（坂本真绫 配音），她是个性格冷淡的黑发少女。 正是因为自己当初选择了网球部，才导致大学两年如此失败，于是“我”假想如果自己入学时选择了另外一个社团，会不会经历另外一种截然不同的大学生活呢？本作从平行时空的角度，围绕着主人公重新从大一新生选择社团开始，选择了各种各样不同社团，发展出不一样的青春故事。
